Page 41 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第2期

第 2 期 刘宁宁 等：牛溶血性曼氏杆菌可视化 LAMP 检测方法的建立 35

M ： DL 2000 DNA marker ； 1 ：阴 性 对 照 Negative control ；
9
2-12 ：7.9×10 - 7.9×10 -1 copies/μL.
M： DL 2000 DNA marker；1：阴性对照；2~4：溶血性曼氏杆菌
图4 可视化LAMP检测lktC质粒灵敏度
A1 型、A2 型、A6 型；5~7：多杀性巴氏杆菌 A 型、B 型、F 型；8：牛支
Fig.4 Sensitivity of visual LAMP to detect lktC plasmid
原体；9：鼠伤寒沙门氏菌；10：产肠毒素型大肠杆菌；11：副流感病毒
3型；12：牛呼吸道合胞体病毒；13：牛病毒性腹泻病毒 1型；14：牛轮
状病毒；15：牛冠状病毒；16：牛传染性鼻气管炎病毒。M： DL 2000
DNA marker； 1： Negative control； 2-4： M. haemolytica A1，A2
and A6； 5-7： P. multocida A，B and F； 8： M. bovis； 9： Salmonella
typhimurium； 10： Enterotoxigenic E. coli； 11： BPIV-3； 12： BRSV；
13： BVDV-1； 14： BRV； 15： BcoV； 16： IBRV.
图2 可视化LAMP的特异性检测
Fig.2 Specificity of visual LAMP M ： DL 2000 DNA marker ； 1 ：阴 性 对 照 Negative control ；
-4
5
2-11 ：6.7×10 - 6.7×10 cfu/μL.
图5 PCR检测A6-ZMD菌液的灵敏度
Fig.5 Sensitivity of PCR to detect A6-ZMD bacterium

M ： DL 2000 DNA marker ； 1 ：阴 性 对 照 Negative control ；
M ： DL 2000 DNA marker ； 1 ：阴 性 对 照 Negative control ；
9
-1
2-12 ： 7.9×10 - 7.9×10 copies/μL.
4 -4
2-10：6.7×10 - 6.7×10 cfu/μL.
图6 PCR检测lktC基因的灵敏度
图3 可视化LAMP检测A6-ZMD菌液灵敏度
Fig.3 Sensitivity of visual LAMP to detect bacterium Fig.6 Sensitivity of PCR to detect lktC
HNB 等。SYBR Green Ⅰ 一般在反应结束后加入，
PCR 仅 能 正 确 检 出 10 份 阳 性 ，敏 感 性 为 66.7%
否则影响 LAMP 反应的效应 ［10］ ，反应后阳性反应液
（95% CI：38.4%，88.2%）（图 8），2 种方法的检测敏
颜色变为荧光绿，在白色背景下观察效果明显，而
感性差异显著（P<0.05）。
HNB与Bst聚合酶亲和力较好，在反应前加入不影响
可视化 LAMP 相较普通 PCR 法，敏感性和特异
反应速率，发生阳性反应的溶液由紫色变为天蓝
性均更高，表明该方法用作溶血性曼氏杆菌更为准 色 ［11-12］ 。通过对不同可视化染料的对比，本研究在
确，在现场快速检测领域具有很好的应用前景。 普通 LAMP 方法的基础上添加 SYBR Green Ⅰ染料
3 讨 论 显色，在反应前提前滴在反应管管盖上，减少反应结
束因开盖可能造成的污染，有效提高了此方法的可
可视化 LAMP 通过添加染料观察颜色变化进行 行性，使可视化LAMP更适合临床应用。
结果的判定，目前常用的染料包括 SYBR Green Ⅰ、 本研究建立的可视化 LAMP 方法检测溶血性曼