Page 35 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第2期
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第 2 期             王宇 等：山羊痘弱毒疫苗 （AV41 株） 接种途径和剂量对牛抗体反应的影响                                   29



























                                         图4  5个试验组的ELISA与病毒中和试验结果散点图
                                Fig.4  Scatter plot of virus neutralisation test and ELISA results in 5 groups
                                                                于中和试验操作复杂、耗时长，本研究建立了一个简
                                                                单线性回归方程实现 ELISA 的 S/P 值向 VNT 中和
                                                                指数的快速转换，可有效解决临床上使用 ELISA 替
                                                                代 VNT 的结果共享困难的问题。由于本研究所用
                                                                数据集较少，该模型的预测效果应进一步使用外部
                                                                测试数据集和野毒感染血清进行优化。
                                                                    ELISA 相对 VNT 的敏感性偏低。VNT 测定的
                                                                为针对疫苗株全病毒的总抗体，而本研究使用的
                                                                ELISA 试剂盒为双抗原夹心法，检测的是对痘病毒
                                                                属特定蛋白（P32 蛋白）的总抗体           ［20］ ，这可能是 VNT
                                                                更加敏感的主要原因。鉴于 ELISA 检测中所使用的
                图5  ELISA S/P值与病毒中和试验中和指数相关性分析                  靶抗原 P32 蛋白在 LSDV 和 GTPV 中的核苷酸同源
               Fig. 5  Correlation analysis between neutralisation index   性为 98.1%，氨基酸同源性为 97.2%，因此认为该
                   of virus neutralisation test and ELISA S/P value
                                                                ELISA 的检测结果对 LSDV 和 GTPV 两种疫苗毒株
               量组却没有，这可能是牛体间的个体差异，确切原因                          的抗体反应的一致性很高。同时，LSDV 和 GTPV
               未知。据文献报道，使用 5 倍与 10 倍剂量的山羊痘                      两种病毒基因组的同源性为 97%             ［21］ ，因此利用山羊
               或绵羊痘弱毒疫苗或 LSDV 弱毒疫苗都有可能出现                        痘弱毒疫苗株进行的中和试验可以代表基于 LSDV
               不 同 程 度 的 免 疫 副 作 用 ，占 接 种 牛 群 的 0.3% 至          的中和试验进行免疫抗体检测。利用强毒力的 LS⁃
               25%，平均为 8%；这种副作用可能与动物的年龄、所                       DV 进行中和试验，具有散毒风险，所以替代方法具
               使用的疫苗毒株等多种因素相关               ［18-19］ ；相同剂量下， 有可操作性。
               成年动物发生副作用比例高，约为 12%，但犊牛与青                        3.4 免疫抗体监测的应用和局限性
               年牛均未出现副作用         ［18］ 。                             由于山羊痘病毒弱毒苗或 LSDV 弱毒苗产生的
                                                                                                        ［7］
               3.3 VNT和ELISA抗体检测呈显著正相关                          免疫保护反应以细胞免疫为主、体液免疫为辅 ，因
                                                                                                          ［3］
                   VNT 是 WOAH 推荐的 LSD 抗体检测的首选方                  此，在《WOAH陆生动物诊断试验和疫苗手册》中 ，
                 ［3］
               法 。本研究证明 ELISA 与 VNT 具有很高的符合                     评价疫苗免疫效力的方法是牛体攻毒法，当免疫牛
               率（95.2%），相关性检验也显示 ELISA 的 S/P 值与                 与非免疫牛所测的病毒毒价相差>lg 2.5 以上时，判
               VNT 的中和指数（NI）间具有高度一致性。同时，鉴                       断为疫苗合格。但攻毒法操作复杂，且必须在生物
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