Page 32 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第2期

26 华 中 农 业 大 学 学 报 第 42 卷

dence intervals，CI），ggplot2 包 ［12］ 用于本研究中箱线 2.3 免疫抗体监测结果
图和散点图的绘制。 免疫后 0~60 d 内，用 ELISA 和 VNT 检测血清
抗体水平，结果如表 2 和图 3 所示。皮下接种组抗体
2 结果与分析
反应高于皮内接种组，表现为抗体反应产生较早，且
2.1 临床症状观测 抗体水平较高。免疫后第 0 天 5 个组 25 头牛 ELISA
与 VNT 检测均为阴性。皮下 5 倍羊剂量组（A 组）免
在 A 组（皮下接种 5 头份羊剂量）的 5 头牛中，2
头牛在疫苗注射后第 10天，在背部、肋部和肩部等区 疫后第 15 天，2 头出现轻微皮肤症状的牛转为 ELI⁃
SA 和 VNT 双阳性，中和抗体效价均为 1∶640。自免
域皮肤表面出现少量直径 5~20 mm 不等的皮肤结
疫后 30 d起，各组均有 3头牛 VNT 检测阳性，转阳率
节，其他部位未见皮肤结节（图 1）。随后皮肤结节逐
达 60%，中和抗体效价在观察期内始终维持在较高
渐消退，免疫后 20 d 皮肤凸起消失。其他组试验牛
水平（≥1∶40 倍）；而 ELISA 抗体检测结果则由 2 头
未见明显临床症状。
阳性增长至 3头阳性。皮内接种 5倍羊剂量组（B组）
在免疫第 15 天起始终有 1 头牛呈 VNT 抗体阳性，转
阳率仅为 20%，中和抗体效价维持在 1∶320 及以上；
而 ELISA 抗体弱于中和抗体反应，自免疫后第 30 天
起仅 1 头牛为阳性。皮下接种 10 倍羊剂量组（C 组）
自第 15 天起 ELISA 抗体检测结果均为 1 头阳性，第
15 和 30 天 VNT 抗体阳性牛均有 2 头 ，转阳率为
40%，中和抗体效价分别为 1∶40 和 1∶640，自 45 d 后

图1 皮下注射5头份羊剂量组牛免疫后 阳性牛降至 1 头。皮内接种 10 倍羊剂量组（D 组）在
第10天皮肤结节症状 第 15 天均为阴性，自免疫后第 30 天起有 2 头牛呈
Fig.1 Skin nodules on 10 day postvaccination ELISA 和 VNT 抗体双阳性，中和抗体效价均维持在
th
of vaccinated cattle in 5-times dose by 1∶40 倍以上。对照组（E 组）在监测期内始终保持
subcutaneous inoculation ELISA 和 VNT 抗体双阴性。综上所述，皮下接种 5

2.2 PCR检测结果 倍羊剂量试验组（A组）产生了最强的抗体反应。
免疫后第 0、15、30、45、60天，所有试验组牛与对 2.4 VNT与ELISA相关性分析
照组牛的鼻咽拭子及血液样品进行常规 PCR 检测， VNT 与 ELISA 检测结果如表 3 所示，总符合率
结果均为阴性（图2）。 为 95.2% （95% CI：89.8~98.2），阳 性 符 合 率 为
87.5% （95%CI：74.8~95.3），阴 性 符 合 率 97.0%
（95%CI：93.4~98.9），Kappa 值 为 0.846 （95% CI：
0.673~1.02，P <0.001）。与 VNT相比，ELISA 敏感
性和特异性分别为 77.8% （95% CI：57.7~91.4）和
100% （95% CI：96.3~100.0），阳性预测率和阴性预
测率分别为 100.0% （95%CI：83.9~100.0）和 94.2%
（95%CI：87.9~97.9）。
VNT 中 和 抗 体 指 数（NI）与 ELISA 所 得
M：DL2000 DNA marker；1：阳性对照（疫苗株 AV41 株）；2：阴性 lg（S/P）值在 5 个试验组的比较结果如图 4 所示。
对照（无菌水）；3~7 分别为 A~E 组鼻咽拭子；8~11 分别为 A~D 受 VNT 中和抗体滴度计算方法所限，多个阴性样品
组 血 液 。 M：DL2000 DNA marker； 1：Positive control （AV41
中和抗体指数为 0（图4E），对于抗体滴度关系分析存
strain）； 2：Negative control （sterile water）； 3-7：Nasopharyngeal
在干扰，去除中和抗体指数为0的值后如图5所示。相
swab samples of groups A，B，C，D and E； 8-11：Blood samples of
关性分析显示，VNT的NI指数与ELISA的lg（S/P）值
groups A，B，C and D.
图2 部分鼻咽拭子与全血LSDV的PCR检测电泳图 存在显著的正相关（Pearson’s ρ = 0.872，P<0.001，
Fig.2 Gel electrophoresis of partial nasopharyngeal 图 5）。线性拟合后所得线性方程式为 NI =0.558×
2
swabs and whole blood with LSDV PCR test lg(S/P value)+1.203，调整后 R 为 0.754，残差符合