Page 23 - 《华中农业大学学报》2020年第6期
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第 ６ 期 左盼盼 等:猕猴桃采后软腐病病原菌鉴定及香芹酚对其控制效果 １ ７
果实中分离获得 ８ 种病原菌 共 ９６ 株, 依 次编号为 到 ９０mm , 可产生黑色菌核; 菌丝有节状隔膜, 直径
MHＧ１~MHＧ８ , 各种类病原菌分别检出 ２３ 、 ３１ 、 １７ 、 为 ６．０５~８．２８ μ m , 具隔膜, 顶端呈 １~２ 次分枝, 分
１０ 、 ５ 、 ４ 、 ４ 和 ２ 株.病原菌的菌落特征和显微结构 枝的末端膨大, 上密生小梗, 小梗上聚生大量分生孢
如图 １ 所示, 根据菌落特征、 生长速率和菌丝孢子形 子; 孢子 为 椭 圆 形, 大 小 为 ( １１．０８~１３．２３ ) m×
μ
态等初步鉴定出 ５ 种. ( ７．８８~９．３５ ) m , 依据上述特征并结合文献[ １８ ] 初
μ
步鉴定为灰葡萄孢菌( Botr y tiscinerea ).
MHＧ４ : 菌落初为白色, 从底部 逐 渐 变 为 红 色,
边缘呈放射状, 气生菌丝为白色且旺盛; 菌丝宽度约
为 ３．４５~５．５２ μ m , 分生孢子为弯月形或纺锤形, 有
２~５ 个隔膜, 大小 为 ( ３．５９~４．９１ ) m× ( ２５．４５~
μ
３３．０６ ) m , 依据上述特征并结合文献[ １９ ] 初步鉴定
μ
为层出镰刀菌( F． p roli f eratum ).
MHＧ５ : 菌落初为白色, 后变为灰绿色, ３d 后转
为墨绿色, 气生菌丝不发达, 边缘整齐, 生长速度适
中; 菌丝有横隔, 宽度约为４．２７~５．８７ μ m ; 分生孢子
呈纺 锤 形、 棍 棒 形 或 梨 形, 褐 色, 大 小 为 ( ７．２１~
８．５４ ) m× ( １９．０２~２３．０７ ) m , 依据上述特征并结
μ
μ
合文献[ １７ ] 初步鉴定为链格孢菌( Alternarias p ． ).
2.2 猕猴桃果实软腐病病原菌的致病性
将分离纯化的病原菌回接至健康猕猴桃果实,
室温放置７d后, ５ 株病原菌造伤接种的猕猴桃果实
均出现了明显的软腐病病状, 而对照组的则不发病
图 １ ５ 种病原真菌在 PDA 培养基上菌落特征( a )、 ( 图 ２A ).对发病组织的病原菌重新分离再培养后,
显微菌丝形态( b ) 和孢子形态( c ) 观察
其培养特性和菌丝形态与原病菌一致.由图 ２B 可
Fi g ．１ Colon yg rowthinPDAmedia ( a ), mor p holo g ical
m y celium ( b ) ands p orecharacteristics ( c ) 知, MHＧ１ 与 MHＧ２ 两种病原真菌的病斑直径最大,
offivep atho g enicfun g i 分别为( ４０．３７±０．５５ ) 和( ３７．６±３．３１ ) mm , 致病性
MHＧ１ : 菌丝初为白色, 培养 ３d 后从菌落中央 最强, 而 MHＧ３ 和 MHＧ４ 致病性最弱.因此, 本研
究进一步利用 ITS 基因序列对 MHＧ１ 、 MHＧ２ 进行
渐转为墨绿色, 菌落边缘不整齐, 气生菌丝发达, ７d
后, 菌落颜色加深至黑色; 菌丝有节状隔膜, 多核, 直 分子鉴定.
2.3 猕猴桃果实软腐病病原菌的分子鉴定
径约３．５５~５．６９ μ m , 依据上述特征并结合文献[ １６ ]
初步鉴定为葡萄座腔菌( Botr y tisdothidea ). 以通用引物进行 PCR 扩增得到 MHＧ１ 和 MHＧ
MHＧ２ : 菌丝为白色, 边缘较整 齐, 呈 明 显 轮 状 ２ 菌株的rDNAＧITS 序列, 电泳图谱显示 ２ 个菌株
生长, 气生菌丝不发达, 紧贴培养基生长且生长速度 的rDNAＧITS 序列长度大小为 ５００~７５０b p 图 ３ ).
(
较慢, ５d后产生菌核; 菌丝较细, ２．４５~３．８６ μ m , 分 测序结果显示 MHＧ１ 、 MHＧ２ 菌株的 rDNAＧITS 序
生孢子器暗褐色、 分散、 球形或扁球状、 单腔; 分生孢 列大小分别为 ５５２ 、 ５８７b p 与电泳图谱结果一致.
,
子梗分 隔、 细 长, 孢 子 形 状 似 麦 粒, 孢 子 大 小 为 将获得的序列与 GenBank 中已有序列进行同源性
( ２．０７~２．８８ ) m× ( ６．２１~７．８９ ) m .依据上述特 比较, 发现 MHＧ１ 、 MHＧ２ 与葡萄座腔菌 B．dothidea
μ
μ
征并结合 文 献 [ １７ ] 初 步 鉴 定 为 拟 茎 点 霉 菌 ( PhoＧ ( KP１８３１７５．１ )、拟 茎 点 霉 菌 Phomo p sis s p ．
mo p siss p ． ). ( KJ７３９４９３．１ ) 的同源性均达到 ９９％ .因此, MHＧ１ 与
MHＧ３ : 菌丝为灰白色绒状, 然 后 转 为 浅 褐 色, MHＧ２两种 病 原 菌 分 别 鉴 定 为 葡 萄 座 腔 菌 ( B．doＧ
菌落边缘较整齐, 气生菌丝旺盛, ３d后菌落直径达 thidea ) 与拟茎点霉菌( Phomo p siss p ． ).
