Page 35 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第1期

第 1 期 张焱 等：甜樱桃扩展蛋白 PavEXPA2 基因克隆与表达分析 29

图1 PavEXPA2基因ORF序列及编码的氨基酸序列
Fig.1 ORF sequence and encoded amino acid sequence of PavEXPA2 gene

图3 PavEXPA2 蛋白的跨膜域预测
Fig. 3 Prediction of the transmembrane domain
of PavEXPA2 protein
ca）、梅（Prunus mume）扩展蛋白基因同源性最高，分
C-score（raw cleavage site score）：用来区分是否为剪切位点，最高
峰值为剪切位点后的第 1 个氨基酸； S-score （signal peptide score）： 别为 97.49%、97.47% 和 96.91%，并且发现 PavEX⁃
用来区分对应位置是否为信号肽区域；Y-score （combined cleavage PA2有较高保守性，含有DPBB_1保守结构域。
site score）：用于避免多个高分 C-score 值对结果的影响。 C-score 利用 DNAMAN 软件将 PavEXPA2 基因的开放
（raw cleavage site score） of the ordinate： Used to distinguish wheth‐
阅读框翻译成氨基酸序列，并将其序列与 30 个和
er it is a cleavage site， and the highest peak is the first amino acid af‐
PavEXPA2 蛋白同源性较高的氨基酸序列进行对
ter the cleavage site （that is， the first amino acid of the mature pro‐
比，发现该基因编码氨基酸序列与桃、扁桃和梅扩展
tein），an amino acid residue）； S-score （signal peptide score）： Used
to distinguish whether the corresponding position is a signal peptide 蛋白氨基酸序列的同源性较高，分别为 95.58%、
region； Y-score （combined cleavage site score）： The geometric 95.56%和94.76%。
mean of C-score and S-score， used to avoid the influence of multiple
利用 MEGA5.1 软件对甜樱桃扩展蛋白 PavEX‐
high score C-score values on the results.
PA2 与 BLAST 检索得到其他物种（柑橘、杨梅、胡
图2 PavEXPA2蛋白的信号肽预测 杨、杨树）扩展蛋白氨基酸序列全长，构建系统进化
Fig. 2 Signal peptide prediction of PavEXPA2 protein
树，结果发现甜樱桃 PavEXPA2 与 PmEXPA2（梅）、
在线软件对甜樱桃 PavEXPA2 蛋白进行亚细胞定位
PdEXPA2（扁桃）和 PpEXPA2（桃）序列相似程度最
预测分析，发现该蛋白主要位于细胞壁中。
高，亲缘关系最近（图4）。
2.2 PavEXPA2基因的同源性分析
2.3 PavEXPA2的组织特异性表达
将 PavEXPA2 基因序列在 NCBI 网站上进行 PavEXPA2 在甜樱桃“桑提娜”即将脱落组织，
BLAST 同源检索，发现它与很多植物都具有较高的 如茎、花芽、花朵，叶、叶柄、果柄和果实的表达结果
同源性，其中与扁桃（Prunus dulcis）、桃（Prunus persi⁃ 显示，在成熟叶叶柄中表达量最高，随后依次是盛开