Page 14 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第1期

8 华 中 农 业 大 学 学 报 第 42 卷

图5 沙子空心李种质N1及L1分子身份证
Fig.5 Prunus salicina Lindl. Shazikongxinli
图4 92份沙子空心李聚类结果 N1 and L1 molecular IDs
Fig.4 Dendrogram of 92 Shazikongxinli
germplasms based on IRAP bands 3 讨 论
串构建指纹代码。以种质 N1 和 L1 为例，N1 指纹代 3.1 IRAP体系优化
码为：1A01000000000110001I000000000101，第 1 位 本研究通过 L 16 （ 4 ） 正交试验确定 10 μL 沙子
3
数字 1 代表采样地 1（沿河县南庄村），A 代表 IRAP 空心李 IRAP-PCR 反应的最优体系，经反复试验，认
引 物 Ty3-2，I 表 示 引 物 Ty3-6；L1 指 纹 代 码 为 ： 为 Mix 及 IRAP 引物含量是影响 PCR 结果优劣的主
2A01010001010011001I011010000101，第 1 位数字 2 要影响因素。MIX 和 IRAP 引物含量过低时，PCR
代表采样地 2（沿河县黎家寨），最终利用每个种质的 扩增结果中条带均较少且较为暗淡，易造成试验误
指纹代码，分别生成包含基本信息的条形码和二维 差，影响试验结果。但 Mix 和 IRAP 引物含量也不可
码（图5）。 太高，IRAP 引物含量过高时，容易导致引物二聚体
的产生，同时也会增加导致非特异扩增及错配的可
表5 IRAP引物鉴别供试种质情况 能性 ［17］ ，而 Mix 含量太高则会造成不必要的浪费，达
Table 5 The number of germplasms that can be identi⁃
fied by IRAP primers 不到经济高效的目的；另外，循环次数也是影响 PCR
扩增结果的重要因素，循环次数与 PCR 产物浓度成
鉴定种质数
鉴定比率/%
编号 编码 IRAP引物 Number of 正比，次数太少易导致产物含量太少，而循环次数太
Identification
No. Code IRAP primers germplasm that 多也会导致非特异性产物的产生，循环次数一般选
ratio
can be identified
择 30~40 次 ［18］ 。本试验对 10 μL IRAP-PCR 反应体
1 A Ty3-2 83 90.22
系进行了优化，经济高效地保证了试验结果的准
2 B Ty3-3 81 88.04
确性。
3 C Ty3-16 78 84.78
3.2 指纹图谱构建
4 D Ty1-7 69 75.00
目前构建指纹图谱的方法相对较多，有直接根
5 E Ty1-15 65 70.65
据条带统计获得的“0/1”数据作为构建指纹的代码；
6 F Ty1-9 59 64.13
还有从多个引物的扩增结果中选取稳定的特异条带
7 G Ty3-5 48 52.17
8 H Ty1-6 36 39.13 组成“0/1”数据构建指纹代码；另外，还可将二进制
9 I Ty3-6 32 34.78 的“0/1”数据转变为十进制的数字形成代码 ［18］ 。指
10 J Ty1-25 28 30.43 纹图谱和分子身份证的构建对于种质鉴别具有重要
11 K Ty3-1 12 13.04 意义。本研究确定引物 Ty3-2 及 Ty3-6 作为种质鉴
12 L Ty1-20 8 8.70 定及指纹图谱构建的高效标记引物，并据此构建了