Page 10 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第1期

4 华 中 农 业 大 学 学 报 第 42 卷

续表 1 Continued Table 1
采样地点 编号 种质 突出性状
Locality Code Germplasms Highlighting botanical traits
70 L30 果大皮薄 Large fruit and thin skin
71 L31 晚熟 Late ripening fruit
72 L32 早熟，果实不离核 Early ripening, flesh does not separate from the core
早熟，果实心形，果抗性差，易裂果 Early maturity, heart-shaped fruit, poor fruit resistance, easy
73 P1
to split fruit
早熟，果实心形，果抗性差，易裂果 Early maturity, heart-shaped fruit, poor fruit resistance, easy
74 P2
贵州省沿河县 to split fruit
十二盘村 早熟，果实心形，果抗性差，易裂果 Early maturity, heart-shaped fruit, poor fruit resistance, easy
75 P3
Shierpan to split fruit
Village, 早熟，果实心形，果抗性差，易裂果 Early maturity, heart-shaped fruit, poor fruit resistance, easy
76 P4
Yanhe to split fruit
County，Gui‐ 早熟，果实心形，果抗性差，易裂果 Early maturity, heart-shaped fruit, poor fruit resistance, easy
77 P6
zhou Province to split fruit
78 P7 无 None
79 P8 花期晚，产量高 Late flowering and high yield
80 P9 果实品质好 Good quality of fruit
81 S1 树龄>50 a Tree age >50 years
82 S2 树龄>100 a Tree age >100 years
83 S3 树龄>100 a Tree age >100 years
贵州省沿河县 84 S4 果实品质好 Good quality of fruit
孙家寨 85 S5 果大，品质好 Large fruit and good quality
Sunjiazhai Vil‐ 86 S6 果大，果皮光滑 Large fruit with smooth skin
lage, Yanhe 87 S7 早熟 Early ripening fruit
County，Gui‐
88 S8 果实品质好 Good quality of fruit
zhou Province
89 S9 果实品质好 Good quality of fruit
90 S10 树龄>50 a Tree age >50 years
91 S11 果大，品质好 Large fruit and good quality
92 S12 产量高、稳定 High and stable yield
1.2 基因组DNA提取 dNTP、4 mmol/L MgCl 2 ）、IRAP引物和模板DNA的
通过植物基因组 DNA 提取试剂盒 DP320（北 用量；PCR 扩增程序为：94 ℃预变性 4 min；94 ℃变性
京，天根）提取 92 份供试材料幼嫩叶片 DNA 后，经 30 s，51~58 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 1 min；72 ℃再延
1% 琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测质量及 伸 10 min；4 ℃保存；在此基础上对 PCR 循环次数设

浓度后，将 DNA 稀释至约 30 ng/μL，置于-20 ℃ 置3个梯度：30、35及40次。
保存。 1.5 IRAP引物筛选与PCR扩增
1.3 IRAP引物开发 根据已优化的 10 μL IRAP-PCR 体系，随机选取
通过 Clustal W 对李反转录转座子 Ty1-copia 和 8个供试种质 DNA 作为模板，利用筛选出来的 IRAP
Ty3-gypsy 的 RT 序 列（NCBI：K78998~K79023； 引物对 92 份沙子空心李种质进行 PCR 扩增，每个引
K79024~K79041）进行多序列比对，获得保守区域， 物重复 2~3 次，PCR 产物在 1×TAE 缓冲液中用
采用 Primer 5.0 程序以保守区域上游序列设计单向 1.5% 琼脂糖凝胶以 6 V/cm 电泳 40 min 后，于凝胶
引物 ［14］ ，共获得65条IRAP引物，由上海生工合成。 成像系统中观察并保存图像。
1.4 IRAP-PCR体系优化 1.6 数据处理与分析
设计 L 16 （ 4 ） 正交试验（表 2）优化 10 μL 沙子空 仅统计每个引物清晰明亮且可重复的条带，有
3
心李 IRAP-PCR 反应体系的主要影响因素 Mix（赛 和无条带分别以“1”和“0”记录，获得每个引物的数
［15］
默 飞 ；0.4 mmol/L Taq DNA 聚 合 酶 、0.4 mmol/L 据矩阵，通过 POPGEN 1.32 分析每个 IRAP 引物