Page 12 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2023年第1期

6 华 中 农 业 大 学 学 报 第 42 卷

表3 18条IRAP引物信息
Table 3 Information of 18 IRAP primers

引物名称 引物序列 退火温度/℃
Primer name Prinmer sequence Annealing temperature
Ty1-2 TGGCCTGAAACAGTCTC 52.0
CGGAGACTTAGAAGAG‐
Ty1-3 52.4
GAG
CAACCACAAGGGTAT‐
Ty1-6 52.7
GAAG
AAGGAAGTCCCTGTAT‐
Ty1-7 54.3
GGC
GGTTTGCTGGTT‐
Ty1-9 54.0
GAAGAAGT
AGAAGGCACTTTACG‐ M：DL2000 DNA Marker；数字 1~8 代表 8 个不同种质 1-8 repre‐
Ty1-15 52.3
GATTG sent 8 different germplasm.
ATATGGAACAGC‐ 图2 6条IRAP引物筛选结果
Ty1-17 52.1
CAGAAGG
Fig.2 Screening results of 6 IRAP primers
AAGGCAGTGGAA‐
Ty1-18 53.0 似性系数（DICE 系数）。92 份沙子空心李种质两两
CAAGAAG
之间的 DICE 系数变幅为 0.417~0.830，平均 0.681。
TCAGACAATTCGCAG‐
Ty1-20 55.0
GAGG 在遗传相似系数为 0.645 时，92 份沙子空心李被聚类
ACCAGAAGGGTTTGTT‐
Ty1-25 51.0 为 4 组（图 4），聚类到第 1 组的沙子空心李数量最多，
GAA
包含 30 份沙子空心李种质，第 2 组最少，共 14 个种
TCTGGCTATCAC‐
Ty3-1 54.1
CAAGTCC 质，第 3 组和第 4 组分别有 22 个及 26 个种质。92 份
GAATCGGTATCCATT‐
Ty3-2 52.2 沙子空心李种质采自 4个种植区，然而聚类结果并不
GTCG
呈现出相应的规律性，这可能是因为采样区域地理
TGGCTATCAC‐
Ty3-3 55.1
CAAGTCTGC 间隔较小，栽培环境与技术差异较小，株系间基因交
CAACGCTC‐
Ty3-5 52.3 流频繁，因而聚类结果不规律。但根据聚类结果，92
CAACTTCTTTC
份沙子空心李种质在遗传相似系数为 0.645 时可被
CCGCCCTTTCATTGAC‐
Ty3-6 58.0
GACT 聚类为 4组，这表明供试的沙子空心李种质可能来自
ACCAGCACATCCCTA‐ 4个不同品系。
Ty3-9 55.9
ACCT
2.6 分子指纹图谱构建
CGAGGATTGATGACTT‐
Ty3-14 51.9 利用 18 条 IRAP 引物对 92 份沙子空心李进行
GCT
CCCATACATCCTTCAT‐ PCR 扩增，获得每个引物 92 个种质的 0/1 数据矩阵，
Ty3-16 54.0
CACAG
这些 0/1 数据可作为供试空心李种质指纹图谱或分
2.4 IRAP遗传多样性指数 子身份证构建的直接依据。为达到利用最少的引物
通过 Popgene 1.32 对统计的 0、1 数据进行统计 鉴定尽量多种质的目的，通过对有效等位基因数达
分析，结果（表 4）显示，单个引物的等位基因数为 到 2.000 的 12 条 IRAP 引物的种质鉴别情况进行统
1.667（Ty1-17）~2.000，平均等位基因数 1.930；有效 计（表 5），最终确定核心引物为 Ty3-2，其鉴别率最
等位基因数为 1.046（Ty1-2）~1.647（Ty1-18），均值 高（90.22%），共能鉴定出 83个供试种质，另有 9个沙
1.426；Nei’s基因多样性指数变幅为 0.041（Ty1-2）~ 子空心李种质（N10、N16、N35、N36、L26、L27、S2、
0.379（Ty3-3），平均值 0.261；Shannon 信息指数变幅 S6、S7）无法鉴别出来，需与其他引物组合进行鉴别。
为 0.089（Ty1-2）~0.563（Ty3-3），平均值 0.405；4 个 引物 Ty3-6 与 Ty3-2 组成 1 组核心引物，可鉴别出所
遗传参数中，引物 Ty1-7、Ty1-18 及 Ty3-3 等各项值 有种质，构建高效的指纹图谱。将表 1 中的 4 个采样
均相对较高，而引物Ty1-2及Ty1-3则相对偏低。 地（沿河县南庄村、黎家寨、十二盘村及孙家寨）分别
2.5 沙子空心李种质聚类分析 以数字 1、2、3、4表示，同时 12 条 IRAP 引物依次以字
利用 NTSYS 2.10e 软件计算供试种质的遗传相 母“A-L”表示（表 5），直接以引物扩增出的 0/1 数值