Page 16 - 《华中农业大学学报》2020年第6期

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华 中 农 业 大 学 学 报 第 ３９ 卷
表 １ PCR 、 实时荧光定量 PCR 引物
2 结果与分析
Table１ PCR , q RTＧPCRp rimers
引物 引物序列( ５′Ｇ３′ ) 2.1 萝卜蚜 TERT 基因编码氨基酸序列及二级结
Primers Primerse q uences ( ５′Ｇ３′ )
构分析
TERTF１ CGCCGTGCGAAGGTAAATAGTTTC
TERTR１ TTCAATCGTCGCTCGGCCTT 通过基因克隆、 拼接测序, 得知萝卜蚜 TERT
TERTF２ CCGCTGGGCAGACACGTATA 基因 ( Accessionnumber : MN３８１８４１ ) 序 列 长 度 为
TERTR２ TGGCCGCGTTCAACCGAAAT
２６５８b p 且其起始密码子与终止密码子均包含在
,
TERTF３ AATCTGGGACACGGTGCGTC
序列中即确定为完整的 CDS 序列.序列分析显示,
TERTR３ CGGTATGGTGGTAGGGGACTGGG
该基因能编码８８５ 个氨基酸( 图１ ).将 TERT 氨基
q RTＧTERT F CGACCGCCGTGTCGCATTAG
q RTＧTERT R CGGTATGGTGGTAGGGGACTGGG
酸序列输入 PSIPRED 进行二级 结构分析, 发现其
q RTＧeIF F ATGGCCAAGAAAAAAGATTCCGAAAAGC
二级结构含 ４１ 个 αＧ 螺旋和 ６０ 个卷曲螺旋( 图 ２ ).
q RTＧeIF R ATCAACTACAGTTACTTCTTCTTTAACCA

图 １ 萝卜蚜 TERT 编码氨基酸序列
Fi g ．１ Aminoacidse q uencesofTERTinL．er y simi

红色( Helix ) 代表 αＧ 螺旋; 灰色( Coil ) 代表卷曲螺旋; 绿色( Green ) 代表氨基酸链. Red ( Helix ) standsforαＧhelix ; Gra y ( Coil ) standsfor
coiledＧcoil ; Green ( Strand ) standsforaminoacidstrand．
图 ２ 萝卜蚜 TERT 编码氨基酸二级结构分析
Fi g ．２ Predictedsecondar y structureofTERTinL．er y simi

2.2 萝卜蚜端粒酶 TERT 基因与其他昆虫的系统 蚜 M y zusp ersicae 、 豌 豆 蚜 Ac y rthosi p honp isum
进化分析 的TERT 基因同源性较高.与茶翅蝽 Hal y omorＧ
将萝卜蚜端粒酶 TERT 基因推导出来的氨基酸 p hahal y s 、 苜蓿切叶蜂 Me g achilerotundata 同源
序列与 NCBI上已公布的其他昆虫的端粒酶氨基酸 性较低( 图 ４ ).
序列进行同源性比较. Blast结果显示, 萝卜蚜端粒 2.3 端粒酶 TERT 基因在萝卜蚜不同龄期及不同
酶序列与其他半翅目昆虫具有较高同源性( 图３ ). 组织的表达分析
利用 MEGEX 软件对其进行系统进 化发育分 分别用内参基因和 TERT 基因的引物进行扩
析, 结果显示: 萝卜蚜端粒酶 TERT 基因与麦双尾 增效率的检测, 结果显示: RTＧTERT 引物扩增效
q
蚜Diura p hisnoxiaTERT 基因的关系最近, 与桃 率E＝１０４．５％ , R ＝０．９６４ ; RTＧeIF 引物扩增效率
２
q