Page 40 - 《华农农业大学学报》2020年第2期

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华 中 农 业 大 学 学 报 第 ３９ 卷
1 材料与方法 标 记 引 物 ( PCLG２ 、 PCLG１０ 、 PCLG１３ 、 PCLG１５ 、
PCLG１６ 、 PCLG２９ 、 PCLG３５ 与 PCLG３７ ) .扩增
[ １２ ]
1.1 材 料 体系: １０ × Buffer４ μ L ; dNTP１ μ L ; rＧTa q 酶 ０．１
样品采 集 自 重 庆 ( CQ )、 宜 昌 ( YC )、 丹 江 口 μ L ; 引物 ２ μ L ; 克氏原螯虾基因组 DNA 模板２ μ L ;
( DJK )、 监利( JL )、 洪湖( HH )、 洞庭湖 Ｇ 岳阳( DTHＧ 补充 ddH ２O 至 ２０ μ L . 扩 增 条 件: ９５ ℃ 预 变 性
YY )、 洞 庭 湖 Ｇ 沅 江 ( DTHＧYJ )、 九 江 ( JJ )、 安 庆 ３min ; ９５ ℃ 变性 ３０s ; ５８ ℃ 退 火 ３０s ; ７２ ℃ 延 伸
( AQ )、 巢湖( CH )、 鄱阳湖( PYH )、 太湖( TH ) 与洪 ３０s ; ３５ 次循环后; ７２℃ 再延伸 ７min ; ４℃ 保存.
泽湖( HZH ), 共 １３ 个地域的 ３２６ 尾克氏原螯虾种 ３ ) 聚丙烯酰胺凝胶电泳.电泳检测 PCR 扩增
质群体; 群体平均个体数为 ２５ 尾.分别取虾腹肌肉 产物, 并 对 每 个 标 记 的 各 样 本 电 泳 条 带 进 行 统 计
置于无水乙醇中 －２０℃ 冰箱保存, 备用于提取基因 分析.
组 DNA . 1.3 遗传统计分析
1.2 试验方法 利用 ８ 个 SSR 标记鉴定我国 １３ 个克氏原螯虾
１ ) DNA 提取.取适量( 约 ５０ m g 克氏原螯虾 群体( 表 １ ) 的基因型,通过 POPGENE３．２ 软件 [ １３ ]
)
腹肌肉剪碎后放入 ２mL 离心管内, 采用苯酚 / 氯仿 对 １３ 个 群 体 的 观 测 杂 合 度 ( H o )、 期 望 杂 合 度
[ ３ ] . 用 ２００ μ L 超 纯 水 溶 解
法提 取 基 因 组 DNA ( He )、 等位基因数( Na )、 多态信息含量( PIC )、 HarＧ
DNA , 经琼脂糖凝胶电泳检测合格后存于 －２０℃ 冰 d y ＧWeinber g 平衡指数与遗传距离等进行分析.根
箱中待用. 据遗传距离数据利用 MEGA４．０ 软件 [ １４ ] 对 １３ 个群
２ ) PCR 扩增.扩增引物为已报道的 ８ 个 SSR 体进行遗传聚类分析.
表 １ 克氏原螯虾群体采集地点与样本量
Table１ TheGeo g ra p hicaldistributionandsam p lesizeofthe１３cra y fish ( Procambarusclarkii ) p o p ulations

地名 Location 纬度 Latitude 经度 Lon g itude 样本量 Sam p lesize
宜昌 YC N３０°７６′６０．７９″ E１１１°２８′４７．５５″ ２３
丹江口 DJK N３２°５９′３６．８０″ E１１１°４８′７５．４０″ ２３
监利 JL N２９°８２′０９．５１″ E１１２°８２′０４．３２″ ２５
洞庭湖 Ｇ 岳阳 DTHＧYY N２９°１７′５８．９５″ E１１３°０８′０２．９４″ ２４
洞庭湖 Ｇ 沅江 DTHＧYJ N２８°８４′２７．４８″ E１１２°３９′５９．２４″ ２７
洪泽湖 HZH N３３°２３′３５．７５″ E１１８°５９′５５．１９″ ２９
洪湖 HH N２９°９５′４８．４０″ E１１３°４７′１１．４５″ ２８
太湖 TH N３１°０１′４３．４０″ E１２０°０３′７４．２２″ ２４
巢湖 CH N３１°５９′９４．７９″ E１１７°５７′６０．２９″ ２４
九江 JJ N２９°６７′２４．７０″ E１１５°８５′８６．２３″ ２７
鄱阳湖 PYH N２８°８９′３９．７０″ E１１６°３３′７５．６８″ ２２
安庆 AQ N３０°５５′９８．５１″ E１１７°１３′５４．３７″ ２４
重庆 CQ N２９°９０′３６．５３″ E１０６°１１′１１．７９″ ２６
不同群体中主要基因型的差异, 本研究将各标记位
2 结果与分析
点在不同群体中基因型频率大于 ０．３０ 的基因型作
2.1 不同地域群体 SSR 标记基因型分析 为该群体的主要基因型; 通过对各群体不同标记位
通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测各标记 PCR 产 点的主要基因型的比较发现: 洞庭湖 Ｇ 岳阳、 洪湖与
物( 图 １ ) 发现: 各标记在整个克氏原螯虾样本群体 洪 泽 湖 等 区 域 的 克 氏 原 螯 虾 在 多 个 标 记 位 点
中的等位基因数均为３~５ ; 其中, 标记 PCLG１５ 有５ ( PCLG１０ 、 PCLG１５ 与 PCLG３７ ) 的 主 要 基 因 型 相
个等位基因, 标记 PCLG１３ 、 PCLG１６ 与 PCLG３５ 均 同, 但它们不同于太湖与鄱阳湖等区域的主要基因
有 ４ 个等位基因, 其余的分别为 ３ 个等位基因.各 型( 表 ２ ).所有检测到的主要基因型( ８４ 个) 中纯合
标记位点等位基因按照 PCR 产物片段大小依次定 子( ５８ 个) 约占比 ６９％ , 推测近交可能是致使克氏原
义为“ A ”“ B ”“ C ”“ D ”“ E ” 不同等位基因.为了区别 螯虾种质群体纯化的主要原因.