• 首页|编委会|期刊简介|期刊荣誉|投稿指南|联系我们|过刊浏览
张扬,黄维峰,周菲,林拥军.1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法[J].华中农业大学学报,2020,39(3):9-18
1种简单快速高效的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法
A simple,fast and efficient method of constructing dual-target CRISPR/Cas9 vector
投稿时间:2019-05-14  
DOI:
中文关键词:  水稻  CRISPR/Cas9  基因敲除  基因编辑  双靶点  载体构建
英文关键词:rice  CRISPR/Cas9  gene knockout  gene editing  dual-target  vector construction
基金项目:国家重大科技专项(2016ZX08001-001)
作者单位E-mail
张扬 华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室武汉 430070 zhangyang920507@163.com 
黄维峰 华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室武汉 430070  
周菲 华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室武汉 430070  
林拥军 华中农业大学生命科学技术学院/作物遗传改良国家重点实验室武汉 430070 yongjunlin@mail.hzau.edu.cn 
摘要点击次数: 103
全文下载次数: 65
中文摘要:
      基于Golden Gate载体构建过程,对CRISPR/Cas9双靶点敲除技术的载体构建系统进行了优化,建立了一种简单快速高效且无PCR扩增的双靶点CRISPR/Cas9载体构建方法。在本方法中,只需将设计好的2个靶点DNA小片段和1个外源片段用T4 DNA连接酶构建到CRISPR/Cas9载体上即可。用本方法对10个已报道的水稻基因构建了20个双靶点CRISPR/Cas9载体,阳性率为100%,测序结果显示无突变。该载体系统非常适合大批量CRISPR/Cas9载体的构建,同时也为其他植物中构建双靶点CRISPR/Cas9载体提供借鉴。
英文摘要:
      A simple,fast and efficient method of constructing dual-target CRISPR/Cas9 vector was established based on the Golden Gate ligation. The two designed small target DNA fragments and one exogenous fragment were constructed together into the CRISPR/Cas9 vector with T4 DNA ligase. 20 dual-target CRISPR/Cas9 vectors against 10 reported rice genes were constructed with this method,and the positive rate was 100% with no mutation in sequences. This vector system provides an easy,rapid and efficient method for constructing dual-target CRISPR/Cas9 vector for rice. It also provides a reference for the construction of dual-target CRISPR/Cas9 vectors in other plants.
查看全文  查看/发表评论  下载PDF阅读器
关闭
版权所有:华中农业大学学报(自然科学版)  
主管单位:教育部 主办单位:华中农业大学 地址:湖北武汉南湖狮子山华中农业大学内
电话:027-87287364 电子邮件:hnlkxb@mail.hzau.edu.cn
您是本站第9182350位访问者  今日一共访问766次  
技术支持:北京勤云科技发展有限公司