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刘超,冯勇,董笑笑,张忠明,朱辉.百脉根泛素结合酶LjE2的表达及活性鉴定[J].华中农业大学学报,2019,38(1):22-27
百脉根泛素结合酶LjE2的表达及活性鉴定
Expression and activity identification of ubiquitin binding enzyme LjE2 of Lotus japonicus
  
DOI:
中文关键词:  百脉根  泛素结合酶  体外泛素化  原核表达系统
英文关键词:Lotus japonicus  ubiquitin conjugating enzyme  in vitro ubiquitination  prokaryotic expression systems
基金项目:国家自然科学基金项目 (31770265); 国家科技基础性工作专项(2015FY110700); 中央高校基本科研业务费专项(2662015PY230)
作者单位E-mail
刘超 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉 430070 574404809@qq.com 
冯勇 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉 430070  
董笑笑 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉 430070  
张忠明 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉 430070  
朱辉 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉 430070 zhuhui@mail.hzau.edu.cn 
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中文摘要:
      为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统,表达并纯化到10个LjE2:His融合蛋白。经体外泛素化及Western blot分析,在10个LjE2中有9个具有泛素结合酶活性,1个(LjE2 5)未检测到泛素结合酶活性。
英文摘要:
      Fourteen genes encoding E2(LjE2) in Lotus japonicus genome were identified based on the sequence of E2 in Arabidopsis to study the function and mechanism of ubiquitination in the process of symbiotic nitrogen fixation in legumes. Among them,eleven LjE2s were cloned to construct the fusion expression vectors pET LjE2s:His. Ten LjE2 proteins were successfully expressed and purified under the prokaryotic expression system. The results of ubiquitination in vitro and Western blotting showed that nine LjE2s had ubquitin conjugation enzyme activity and one had no detectable ubquitin conjugation enzyme activity.
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