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舒灿伟,陈健仪,赵美,王陈骄子,周而勋.一种优化的适用于双向电泳的水稻纹枯病菌蛋白质提取方法[J].华中农业大学学报,2017,36(5):15-19
一种优化的适用于双向电泳的水稻纹枯病菌蛋白质提取方法
An optimized protein extraction method suitable for two-dimensional electrophoresis of Rhizoctonia solani AG1 IA
投稿时间:2017-03-28  
DOI:
中文关键词:  水稻纹枯病菌  双向电泳  蛋白质组学  丝状真菌  三氯乙酸
英文关键词:Rhizoctonia solani  two-dimensional electrophoresis  proteomics  filamentous fungi  trichloroacetic acid
基金项目:国家自然科学基金项目(31470247); 广东省自然科学基金(博士启动)项目(1614050001896)
作者单位E-mail
舒灿伟 华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州 510642 shucanwei@scau.edu.cn 
陈健仪 华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州 510642  
赵美 华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州 510642  
王陈骄子 华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州 510642  
周而勋 华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州 510642 exzhou@scau.edu.cn 
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中文摘要:
      为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA 丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的基础上,增加酚/SDS抽提步骤,能够有效地去除样品中的盐离子和色素等杂质,获得背景清晰、分辨率高的蛋白图谱。结果表明,本研究建立了一种优化的TCA 丙酮-酚/SDS联合抽提法,该法适用于水稻纹枯病菌蛋白质双向电泳的提取。
英文摘要:
      To study proteome of Rhizoctonia solani AG1 IA, the causal agent of rice sheath blight disease, three protein extraction methods (TCA-acetone precipitation method, SDS method and TCA-acetone-phenol/SDS method) were compared and a two-dimensional electrophoresis procedure was set up. Gel electrophoresis patterns were analyzed by Quantity One software and the results showed that 557, 309 and 877 protein spots were calculated by using TCA-acetone precipitation method, SDS method and TCA-acetone phenol/SDS method, respectively. Protein extracted by SDS method contained impurities such as salt ions and small molecules, and exhibited the fewest protein spots. Protein obtained by TCA-acetone precipitation method was yellow, indicating pigments contamination. Finally, a combined TCA-acetone precipitation and SDS method could get rid of salt ions, small molecules and pigments and produce a clear and high resolution electrophoresis pattern. Therefore, an optimized TCA-acetone-phenol/SDS extraction method was established in this study, which was suitable for proteins extraction from R. solani AG-1 IA for two-dimensional electrophoresis.
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