毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析
CSTR:
作者:
中图分类号:
S792.117.035.3
基金项目:
中国科学院资助项目;国家科技攻关项目
The Cloning, Expression and Activity Assays of 4-CL cDNA from the Populus tomentosa
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摘要:
从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a( )中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70 ku。酶活性分析表明:该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性,其偏爱性顺序为PA>FA>CA,对SA则没有活性。
引用本文
杨向东,王汉中,胡赞民,刘贵华,沈金雄.毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析[J].华中农业大学学报,2006,25(2):
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