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致犊牛腹泻常见病毒的检测及风险因素分析  PDF

  • 何艳飞 1,2 ✉
  • 覃城皇 1,2
  • 徐肖文 1,2
  • 冼茵儿 1,2
  • 项志杰 1,2
  • 陈颖钰 1,2,3
  • 郭爱珍 1,2,3 ✉
1. 农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室/华中农业大学动物科学技术学院、动物医学院， 武汉 430070； 2. 生猪健康养殖协同创新中心/湖北省兽医流行病学国际科技合作基地， 武汉 430070； 3. 湖北洪山实验室， 武汉 430070

中图分类号： S858.23

最近更新：2025-02-14

DOI：10.13300/j.cnki.hnlkxb.2025.01.019

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EN 引
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摘要

为了解犊牛腹泻主要病毒的流行现状和优势毒株，2021年11月至2023年10月间，运用RT-PCR技术对来自湖北、湖南、河南、广西、贵州、甘肃、山东和内蒙古等地41个牧场的264头腹泻犊牛的264份样品（58份肛拭子、15份肠组织和191份粪便）进行了牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）、牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）、牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）的检测，进一步对以上3种病毒在不同地区、年龄、季节和品种的分布进行了分析。结果显示，BRV、BCoV和BVDV的个体阳性检出率分别为14.02%（95% CI：8.44~16.68）、10.23%（95% CI：6.85~14.53）和12.12%（95% CI：10.06~18.80），78.05%（95% CI：62.39~89.44）的牧场为犊牛腹泻病毒阳性场，29.27%（95% CI：16.13~45.54）的牧场存在有混合感染，BRV与BCoV是最为常见的混合感染组合，检出率为3.42%（95% CI：1.32~5.88）。BRV在我国北方地区、冬季和≤5周龄的犊牛中检出率较高，BCoV在我国北方地区和夏冬季节检出率高，而BVDV在各地区、年龄、品种等方面，检出率无显著差异。结果表明3种病毒在我国11个省份地区的41个牧场的腹泻犊牛中普遍存在，BRV和BCoV是导致犊牛腹泻的主要病毒，并且其流行情况受到地区、季节和年龄的影响，这提示在防控措施中应该考虑这些因素。

犊牛腹泻是一种由环境因素和病原（细菌、寄生虫和病毒）共同作用所致的疾病，被认为是给养牛业造成最大经济损失的疾病之一［

1］，严重影响着犊牛的健康。研究显示，美国南部奶牛场新生犊牛腹泻的发病率和死亡率分别为80%和20%［2］。2017年日本的1项年度报告称因犊牛腹泻造成的经济损失约为10亿日元［3］。在韩国本土肉牛和奶牛中，犊牛腹泻分别导致68.7%和43.6%的死亡率［4］。随着我国养牛业的迅速发展，牛只的南北调运日益频繁，犊牛腹泻已成为制约行业健康发展的重要因素之一。

在致犊牛腹泻病原中，病毒性病原主要包括牛轮状病毒（bovine rotavirus，BRV）、牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）和牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）。有研究显示BRV在全球的流行率约为33.7%［

5］，BCoV在欧洲国家的流行率为2.80%~46.74%［6］，BVDV的抗原流行率高达15.74%，且在世界范围内广泛存在［7］。我国的几项分析结果显示，BRV、BCoV和BVDV的流行率在30.8%~53.0%［6，8-9］。这3种病毒存在易变异、传播速度快、难以治疗和混合感染严重等特点［10］。国内有关致这3种犊牛腹泻病毒的监测数据十分有限，且现有研究多集中在北方地区，有关南方地区腹泻犊牛中重要病毒流行现状的研究很少。

本研究自2021年11月至2023年10月间，运用RT-PCR技术对来自全国8个省份41个牧场的腹泻犊牛样品进行BRV、BCoV和BVDV这3种病毒的检测，并进一步分析以上3种病毒在不同地区、年龄、季节和品种的分布，确定我国部分地区腹泻犊牛中BRV、BCoV和BVDV的感染现状及可能的风险因素，以期为犊牛腹泻的精准防控提供重要的流行病学基础参考。

1 材料与方法

1.1 样本来源

2021年11月至2023年10月间收集来自湖北、湖南、河南、广西、贵州、甘肃、山东和内蒙古等地的41个牧场的264头腹泻犊牛的264份样品（58份肛拭子、15份肠组织和191份粪便），每头牛取1个样品。具体分布和数量如表1所示。

表1  样品地区分布情况
Table 1  Regional distribution of samples

省份

Provinces

牧场数量

Number of ranches

样品数量/份

Number of samples

湖北 Hubei 17 111
甘肃 Gansu 5 38
湖南 Hunan 6 34
河南 Henan 3 27
贵州 Guizhou 2 16
山东 Shandong 2 14
浙江 Zhejiang 1 9
青海 Qinghai 2 4
河北 Hebei 1 3
内蒙古 Inner Mongolia 1 3
安徽 Anhui 1 2

1.2 材料和试剂

Virus DNA/RNA Extraction Kit FT 2.0和反转录试剂盒HiScript Ⅱ Q RT Super Mix for qPCR购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。1.1×T3 Super PCR Mix、DNA Marker、TS-GelRed 核酸凝胶染料购自北京擎科生物科技股份有限公司。引物由北京擎科生物科技有限公司合成。

1.3 样品处理

1）粪便样品。使用棉签取5~6 g粪便样品，加入3倍体积的生理盐水充分振荡混匀，8 000 r/min离心10 min后吸取上清液，反复冻融后保存于-80 ℃冰箱，备用。

2）肛拭子样品。在肛拭子样品加入约3倍体积的生理盐水充分振荡混匀，8 000 r/min离心10 min后吸取上清液，反复冻融后保存于-80 ℃冰箱，备用。

3）组织样品。取有病变的组织（5 mm×5 mm左右），使用无菌剪刀在2 mL微量离心管中剪碎组织，加入无菌的研磨珠，使用匀浆机研磨，10 000 r/min离心5 min，吸取上清液，反复冻融后保存于-80 ℃冰箱，备用。

1.4 核酸检测

取冻融后的上清液，按照DNA/RNA快速提取试剂盒使用说明书提取样本RNA并利用逆转录试剂盒HiScript Ⅱ Q RT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）逆转录为cDNA，存放于-20 ℃冰箱备用。PCR以处理好的样本为模板进行BRV、BVDV和BCoV的检测。本研究所用引物和目的片段大小如表2所示。BVDV和BRV采用PCR进行检测，反应条件分别为：98 ℃ 2 min；98 °C 10 s，退火温度分别为59.3 ℃（BVDV）/55.4 ℃（BRV）12 s，72 ℃ 15 s，35个循环；72 ℃ 5 min。

表2  引物信息和序列
Table 2  Primer information and sequences

病毒Virus

（目的基因 Target gene）

引物

Primer

序列（5′-3′）

Sequences

长度/bp

Size

文献

Reference

BVDV

（5′UTR）

F GCCATGCCCTTAGTAGGACTAGC 290 [11]
R CAACTCCATGTGCCATGTACAGC

BRV

（VP6）

F ACCACCAAATATGACACCAGC 294 [12]
R CATGCTTCTAATGGAAGCCAC

BCoV

（S）

F CTATACCCAATGGTAGGA 885 [13]
R CTGAAACACGACCGCTAT
F GTTTCTGTTAGCAGGTTTAA 488
R ATATTACACCTATCCCCTTG

BCoV采用巢式PCR进行检测，首轮反应条件为：98 ℃ 2 min；98 ℃ 10 s，50.3 ℃ 10 s；72 ℃ 15 s，35个循环；72 ℃ 5 min。取第1轮的产物作为模板进行第2轮PCR程序，98 ℃ 2 min；98 ℃ 10 s，49.3 ℃ 10 s；72 ℃ 15 s，35个循环；72 ℃ 5 min。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，大小正确的阳性条带送北京擎科生物公司公司测序，得到的序列利用NCBI网站的Blast功能进行比对。

1.5 风险因素分析

通过前期对犊牛信息的处理和筛选，选择犊牛年龄、季节、地区和品种作为风险因素，探究这4种因素与3种病毒的阳性检出率的关联。此外，为有效指导临床样本采集及监测，对不同类型的样本也进行了分析研究。采用卡方检验对年龄、季节、地区和品种等影响因素做单因素分析，P<0.05，表示差异具有统计学意义，采用广泛应用的Logistic回归分析方法对差异显著的风险因素进行二元Logistic回归分析［

14］，判定各风险因素的影响程度。

2 结果与分析

2.1 腹泻犊牛信息统计

对收集的264头腹泻犊牛的品种、收集季节、收集地区、年龄和样本类型进行统计。在本研究中，基于样本数量匹配的原则，将年龄依照≤5周龄和>5周龄进行分类，季节按照春季（3—5月）、夏季（6—8月）、秋季（9—11月）和冬季（12、1和2月）分类，而牛的品种划分为肉牛（西门塔尔牛、安格斯牛和本土肉牛）和奶牛（荷斯坦牛），样品的地区以秦岭淮河为分界线被划分为南方和北方，此外将粪便作为1个类型，肠组织和肛拭子合并为1个类型（表3）。

表3  腹泻犊牛信息分布
Table 3  Distribution of information on diarrhea calves

腹泻犊牛信息

Diarrhea calf information

占比/%

Percentage

周龄

Weeks of age

≤5 40.32（102/253）
>5 59.68（151/253）
季节 Season 春季 Spring 24.24（64/264）
夏季 Summer 24.24（64/264）
秋季 Autumn 17.80（47/264）
冬季 Winter 33.71（89/264）
品种Species 肉牛 Beef cattle 70.75（179/253）
奶牛 Dairy cattle 29.25（74/253）
地区 Area 南方 South 65.13（170/261）
北方 North 34.87（91/261）
样品类型 Sample type 粪便 Stool 66.29（175/264）
肛肠拭子 Anorectal swab 33.71（89/264）

2.2 BRV、BCoV和BVDV的阳性检出率

利用RT-PCR对264份临床样品进行检测，PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，大小正确的条带送公司测序，得到的所有BRV、BCoV和BVDV的序列，大小分别在294、488和290 bp左右，得到的序列利用NCBI网站的Blast功能进行比对，均为对应的病毒（图1）。其中检测到任意一种病毒的牧场被定义为阳性牧场。结果显示，78.05%（95% CI：62.39~89.44）的牧场为阳性牧场，个体水平上，BRV、BCoV和BVDV的阳性检出率分别为14.02%（95% CI：8.44~16.68）、10.23%（95% CI：6.85~14.53）和12.12%（95% CI：10.06~18.80），且这3种病毒的阳性检出率无显著差异（P>0.05）（表4）。

图1  BRV（A）、BCoV（B）和BVDV（C）的部分序列比对结果

Fig. 1  Partial sequence alignment results of BRV（A），BCoV（B）and BVDV（C）

黑色框表示同源性最高的序列。Black box indicates the sequence with the highest homology.

表4  BRV、BCoV和BVDV的阳性检出率
Table 4  Positivity rate of BRV，BCoV and BVDV

病原

Pathogens

阳性检出率/%

Positivity rate

95% CI
BRV 14.02（37/264） 10.1~18.8
BCoV 10.23（27/264） 6.8~14.5
BVDV 12.12（32/264） 8.4~16.7

进一步对多病毒混合感染情况进行了分析，结果发现最为常见的病毒感染组合为BRV与BCoV，阳性检出率最高3.03%（95% CI：1.32~5.88），而BRV与BVDV和BCoV与BVDV阳性检出率分别为0.38%（95% CI：0.01~2.09）和0.76%（95% CI：0.09~2.71），具体信息如表5所示。

表5  病毒混合感染类型和混合感染率
Table 5  Types of viral co-infections and co-infection rates

病原

Pathogens

阳性检出率/%

Positivity rate

95% CI
BRV+BCoV 3.03（8/264） 1.32~5.88
BRV+BVDV 0.38（1/264） 0.01~2.09
BCoV+BVDV 0.76（2/264） 0.09~2.71

2.3 不同年龄与犊牛感染BRV、BCoV和BVDV的关联

在264份犊牛样品中，11份无年龄信息，因此在进行年龄分析时将其剔除。由表6和表7可知，余下的253头腹泻犊牛中，≤5周龄犊牛中，BRV的阳性检出率达到了25.49%（95% CI：17.38~35.08），显著高于>5周龄的犊牛（P<0.05）。≤5周龄的腹泻犊牛感染BRV的风险是>5周龄腹泻犊牛的4.35倍（OR=4.35，95% CI： 2.04~9.29）。而在≤5周龄犊牛中，BCoV的阳性检出率是12.75%（95% CI：6.96~20.81），高出>5周龄的犊牛的阳性检出率9.27%（95% CI：5.16~15.07）。BVDV在>5周龄的犊牛的阳性检出率为14.57%（95% CI：9.36~21.22），高于≤5周龄犊牛的阳性检出率。BCoV与BVDV在>5周龄与≤5周龄的犊牛中阳性检出率无显著差异（P>0.05）。

表6  不同周龄腹泻犊牛3种病毒阳性检出率
Table 6  Positivity rate of the 3 viruses in diarrhea calves at different weeks of age

周龄

Weeks of age

BRVBCoVBVDV

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity

95% CI
≤5 25.49（26/102） 17.38~35.08 12.75（13/102） 6.96~20.81 6.86（7/102） 2.80~13.63
>5 7.28（11/151） 3.69~12.66 9.27（14/151） 5.16~15.07 14.57（22/151） 2.80~13.63
表7  周龄与3种病毒阳性检出率卡方检验的P值和相关系数比值（OR）
Table 7  The P values and correlation coefficient ratios （OR） of the chi-square test for weeks of age and positivity rate of the 3 viruses

周龄

Weeks of age

BRVBCoVBVDV
P值 P valueOR95% CIP值 P valueOR95% CIP值 P valueOR95% CI
≤5 <0.001 4.35 2.04~9.29 0.059 1.43 0.64~3.18 0.380 0.43 0.18~1.05
>5 1.00 0.11~0.49 1.00 0.31~1.56 1.00 0.95~5.64

2.4 不同季节与犊牛感染BRV、BCoV和BVDV的关联

从表8和表9可以看出，BRV在四季都有检出，其中在冬季的阳性检出率最高为23.60%（95% CI：15.24~33.78），最低是在秋季，也高达8.51%（95% CI：2.37~20.38），在春、夏季的阳性检出率相同。此外，犊牛感染BRV的风险在不同季节差异显著（P<0.05），在冬季犊牛感染BRV的风险分别是春季、夏季和秋季的2.99、2.99和3.32倍（OR=3.32，95% CI：1.07~10.33）。BCoV在夏季的阳性检出率最高，为14.06%（95% CI：5.16~15.07），在其他季节的阳性检出率为6.38%~13.48%（95% CI：0.98~22.37），不同季节对这3种病毒无显著影响差异（P>0.05）。BVDV在四季的检出率为10.11%~14.06%（95% CI：4.73~25.74），每个季节阳性检出率差异不显著（P>0.05）。以上结果表明，相对于其他季节，冬季BRV发生的频率更高，其他病毒在不同季节流行情况均无显著差异。

表8  不同季节腹泻犊牛3种病毒的阳性检出率
Table 8  Positivity rate of the 3 viruses in diarrhea calves in different seasons

季节

Season

BRVBCoVBVDV

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI
春季 Spring 9.38（6/64） 3.52~19.30 4.69（3/64） 0.98~13.09 12.50（8/64） 5.55~23.15
夏季 Summer 9.38（6/64） 3.52~19.30 14.06（9/64） 6.64~25.02 14.06（9/64） 6.64~25.02
秋季 Autumn 8.51（4/47） 2.37~20.38 6.38（3/47） 1.34~17.54 12.77（6/47） 4.83~25.74
冬季Winter 23.60（21/89） 15.24~33.78 13.48（12/89） 7.17~22.37 10.11（9/89） 4.73~18.33
表9  季节与3种病毒阳性检出率卡方检验的P值和相关系数比值（OR）
Table 9  P values and correlation coefficient ratios of the chi-square test for season and positivity rate of the 3 viruses

季节

Season

BRVBCoVBVDV
P值 P valueOR95% CIP值P valueOR95% CIP值 P valueOR95% CI
春季 Spring 0.017 1.11 0.30~4.18 0.176 1.00 0.19~5.15 0.899 1.27 0.46~3.49
夏季 Summer 1.11 0.30~4.18 3.33 0.86~12.92 1.45 0.54~3.90
秋季 Autumn 1.00 0.23~4.26 1.39 0.27~7.19 1.30 0.43~3.91
冬季Winter 3.32 1.07~10.33 3.09 0.83~11.43 1.00 0.38~2.65

2.5 不同地区与犊牛感染BRV、BCoV和BVDV的关联

基于样本数量匹配的原则以及剔除未知地区来源的3份样品，将261份样品来源地区按照秦岭淮河分界线划分为南方地区和北方地区。表10和表11的结果显示，BRV在北方地区的阳性检出率为24.18%（95% CI：15.81~34.28），远高于南方地区的阳性检出率8.82%（95% CI：5.02~14.14），在南北两地区犊牛中BRV检出率差异显著（P<0.05），在北方地区犊牛检出BRV的风险是南方的3.29倍（OR=3.29，95% CI： 1.61~6.73）。同样值得注意的是，BCoV在北方的阳性检出率为20.88%（95% CI：16.70~38.10）远高于南方地区的阳性率4.71%（95% CI：2.05~9.06）；此外，BCoV的阳性检出率在南北地区差异显著（P<0.05），在北方地区犊牛检出BCoV的概率是南方的5.34倍（OR=5.34，95% CI： 2.24~12.71）。而BVDV在南方地区的阳性检出率要高于北方地区，南方地区的阳性检出率为12.35%（95% CI：7.81~18.26），而北方的阳性检出率为8.79%（95% CI：3.87~16.59），表明两者差异不显著（P>0.05）。

表10  不同地区3种病毒的阳性检出率
Table 10  Positivity rate of the 3 viruses in different area

地区

Area

BRVBCoVBVDV

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI
南方 South 8.82（15/170） 5.02~14.14 4.71（8/170） 2.05~9.06 12.35（21/170） 7.81~18.26
北方 North 24.18（22/91） 15.81~34.28 20.88（19/91） 16.70~38.10 8.79（8/91） 3.87~16.59
表11  地区与3种病毒阳性检出率卡方检验的P值和相关系数比值（OR）
Table 11  P values and correlation coefficient ratios of the chi-square test for area and positivity rate of the 3 viruses

地区

Area

BRVBCoVBVDV
P值 P valueOR95% CIP值 P valueOR95% CIP值 P valueOR95% CI
南方 South <0.001 1.00 0.15~0.62 <0.001 1.00 0.08~0.45 0.761 1.00 0.62~3.45
北方 North 3.29 1.61~6.73 5.34 2.24~12.71 0.68 0.29~1.61

2.6 不同品种与犊牛感染BRV、BCoV和BVDV的关联

在264份犊牛样品中，11份无品种信息，将其剔除。表12、表13的结果显示，BRV、BCoV及BVDV在肉牛中的阳性检出率为15.64%（95% CI：10.65~21.81）、10.61%（95% CI：6.51~16.08）和13.97%（95% CI：9.25~19.92），在奶牛中的阳性检出率为12.16%（95% CI：5.71~21.84）、10.81%（95% CI：4.78~20.20）和5.41%（95% CI：1.49~13.27）。不同品种的犊牛3种病毒的检出率无显著差异。

表12  不同品种3种病毒的阳性检出率
Table 12  Positivity rate of the 3 viruses in different species

品种

Species

BRVBCoVBVDV

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI
肉牛 Beef cattle 15.64（28/179） 10.65~21.81 10.61（19/179） 6.51~16.08 13.97（25/179） 9.25~19.92
奶牛 Dairy cattle 12.16（9/74） 5.71~21.84 10.81（8/74） 4.78~20.20 5.41（4/74） 1.49~13.27
表13  不同品种与3种病毒阳性检出率卡方检验的P值和相关系数比值（OR）
Table 13  P values and correlation coefficient ratios of different species to the chi-square test for positivity rate of the 3 viruses

品种

Species

BRVBCoVBVDV

P值

P value

OR95% CI

P值

P value

OR95% CI

P值

P value

OR95% CI
肉牛 Beef cattle 0.476 1.34 0.60~3.00 0.963 2.84 0.95~8.47 0.052 0.83 0.38~1.78
奶牛 Dairy cattle 1.00 0.33~1.67 1.00 0.12~1.05 1.00 0.56~2.60

2.7 二元Logistic回归分析

单因素分析结果显示：对于BVDV，犊牛周龄、季节、地区和品种不是风险因素，而BCoV只有地区因素是风险因素，犊牛的周龄、季节和品种并不是风险因素，只有BRV符合多因素分析方法，分析方法使用二元Logistic回归分析，选择以犊牛的年龄、地区和季节等风险因素作为自变量，是否检出BRV为因变量建立二元Logistic回归模型，回归模型成立（Omnibus检验χ2为30.35，P<0.001），模型拟合度效果较好（χ2为3.58，P=0.893>0.05）。

二元Logistic多因素回归分析结果如表14所示。由表14可知，相较南方地区，北方地区的检出BRV的风险更大，差异具有统计学意义（P<0.05，OR=4.03，95% CI：10.65~21.81）。≤5周龄的犊牛的检出BRV的风险是>5周龄犊牛的4.59倍，差异具有统计学意义（P<0.05，OR=4.59，95% CI：1.41~11.55）。在冬季犊牛检出BRV的风险更大，差异具有统计学意义（P<0.05，OR=3.42，95% CI：1.76~15.33）。

表14  二元Logistic多因素回归分析结果
Table 14  Results of binary logistic multifactor regression analysis

风险因素

Risk factors

BSDWalsPOR

置信区间

95% CI

周龄 Weeks of age 1.40 0.54 6.75 0.009 4.59 1.41~11.55
地区 Region 1.52 0.41 13.57 <0.001 4.03 2.04~10.31
季节 Season 3.01 0.39
春季 Spring 1.04 0.68 2.31 0.13 2.82 0.74~10.80
夏季 Summer 0.91 0.73 1.57 0.21 2.49 0.60~10.38
冬季 Winter 1.23 0.77 2.57 0.02 3.42 1.76~15.33
常量Constant -4.08 0.72 32.57 <0.001 0.017

注：  B为参数估计值，SD为标准误差，OR（比数比：为事件发生的概率与不发生的概率之比），Wals为瓦尔德值；95% CI为95%置信区间。Note： B is the parameter estimate； SD is the standard error； OR （ratio： ratio of the probability of occurrence）； Wals is Wald； 95% CI is 95% confidence interval.

2.8 不同样本类型与BRV、BCoV和BVDV阳性检出率的关联

为了确定用于检测BRV、BCoV和BVDV的最佳采样方案，本研究对不同样本类型进行了分析。由表15可知，BRV、BCoV和BVDV在粪便类型的样品阳性检出率分别为11.43%（95% CI：10.65~21.81）、9.34%（95% CI：6.51~16.08）和11.43（95% CI：9.25~19.92），低于肛肠拭子在BRV、BCoV和BVDV的阳性检出率。由表16可知，3种病毒的阳性检出率与样品类型之间差异均不显著（P>0.05），表明样本类型不同并不会影响3种病毒的阳性检出率。

表15  不同样本类型3种病毒的阳性检出率
Table 15  Positivity rate of the 3 viruses in different sample types

样品类型

Sample type

BRVBCoVBVDV

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI

阳性率/%

Positivity rate

95% CI
粪便 Stool 11.43（20/175） 10.65~21.81 9.34（16/175） 6.51~16.08 11.43（20/175） 9.25~19.92
肛肠拭子 Anorectal swab 19.10（17/89） 5.71~21.84 12.36（11/89） 4.78~20.20 12.50（12/89） 1.49~13.27
表16  样本类型与3种病毒阳性检出率卡方检验的P值和相关系数比值（OR）
Table 16  P value and correlation coefficient ratios of sample type to the chi-square test for positivity rate of the 3 viruses

样品类型

Sample type

BRVBCoVBVDV

P值

P value

OR95% CI

P值

P value

OR95% CI

P值

P value

OR95% CI
粪便 Stool 0.090 0.55 0.27~1.11 0.415 0.71 0.32~1.61 0.629 0.83 0.38~1.78
肛肠拭子 Anorectal swab 1.00 0.90~3.70 1.00 0.62~3.16 1.00 0.56~2.60

3 讨论

为了解BRV、BCoV和BVDV在腹泻犊牛中的流行情况，通过对不同年龄、地区、品种、季节和样品类型进行分析，发现这3种病毒在我国犊牛中感染严重，且存在混合感染，其中最为常见的感染组合为BRV与BCoV，与其他研究结果类似［

8，15］。

本次腹泻犊牛中的BRV的总阳性检出率为14.02%（95% CI：8.44~16.68），低于部分文献报道的国内BRV平均感染率35.3%［

16］（例如在宁夏、河北唐山和山东BRV的感染率分别为53.39%［10］、29.44%［17］和17.70%［18］），其原因主要是因为病毒的流行情况受到时间、空间和管理因素等多方面的影响［19］。本项研究的样品主要来源于华中地区，相对北方地区，华中地区肉牛养殖规模略低，且防控水平略高，因此有着相对北方更低的检出率［20］。但从结果而言，能够表现为较高的感染情况。对比5周龄以上的犊牛，5周龄以下的犊牛检出BRV的风险更高，其他研究人员也报道了类似的发现［19，21］，不同年龄犊牛BRV的阳性检出率均差异显著（P<0.05），或许是由于犊牛的免疫系统不完善导致BRV的传播［22］，这表明更需要加强对5周龄以下的BRV的早期防控。从样品的采集季节来看，BRV在冬季的阳性检出率最高23.06%（95% CI：15.24~33.78），这和以前显示BRV在冬季流行的结果一致［23］。这意味着温度的下降，对于BRV的传播是有利的。就地区而言，中国北方地区BRV的阳性检出率显著高于南方地区（P<0.05），这可能是因为北方地区寒冷，以及饲养量大造成的。这提示我们需要对北方地区5周龄以下的犊牛进行更多的监测，特别是在冬季，以便尽早发现，及时采取控制措施。

BCoV的流行与BRV有着相同的趋势。本研究中的检测结果略低于文献报道的北方流行情况。此外本次检测结果显示：BCoV在冬季以及北方地区阳性检出率最高，且北方地区的阳性检出率与南方地区差异显著（P<0.05）。这部分结果不仅与我们的阳性检出情况相吻合，也表明在北方更要加强卫生管理和温度控制，加强圈舍、设备和工具的卫生管理，确保牧场清洁卫生。提供合适的牛舍供犊牛避寒，确保牛舍温度适宜，避免低温对犊牛的影响。

本研究在32.20%（85/264）的腹泻样品检测出3种病毒的核酸，其他的腹泻样品未检出病毒核酸，而造成犊牛腹泻的不仅有病毒，还有细菌和寄生虫。在一项关于腹泻犊牛的病原学调查结果显示：细菌与寄生虫的检出率为35.00%（77/220），病毒的检出率为12.27%（27/220）［

21］。其次饲养环境和气候等也会影响犊牛腹泻发病率［24］，例如在本研究中，部分未检出病毒的样品是在特别寒冷或者是温差较大的时期得到的。因此，在预防和控制犊牛腹泻方面，除了关注病毒的防控外，还需要综合考虑细菌、寄生虫和环境等多方面因素，采取综合性的防控措施，以降低犊牛腹泻的发病率。

犊牛腹泻是养牛业中一项常见且重要的疾病，对养牛业经济造成了严重损失。确定我国部分省份犊牛腹泻病毒流行的现状和相关风险因素，有助于对养牛场犊牛腹泻病的精准防控。本研究结果显示BRV、BVDV和BCoV在中国部分省份地区广泛分布，且存在有混合感染。在北方地区，冬季和≤5周龄的牛，BRV的检出率高；北方地区的犊牛BCoV的检出率更高；BVDV在犊牛中的检出率，不受地区、品种、季节和年龄的影响。

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