Page 16 - 《华中农业大学学报（自然科学版）》2024年第1期
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10                                 华 中 农 业 大 学 学 报                                    第 43 卷

                   由于番茄在不同生育期内对营养物质的积累与                         番茄植株，以植株为中心，用消毒铁铲铲松半径约 25
               转化不同，因此，探究番茄不同生育期根际土壤微生                          cm的圆圈土层后，然后手握植株茎基部，拔取整个番
               物变化特征有助于挖掘有益微生物资源。目前尚未                           茄植株。采用抖根法         ［10］ 抖掉非根际土壤，采集附着
               见对于不同生育期番茄土壤及根际微生物群落组成                           在番茄植株根系上的土壤，作为根际土壤样品装入
               的研究报道，本研究通过测定不同生育期番茄根际                           编好号的无菌自封袋中；除去根际土壤样品中的杂
               土壤生物学性状以及番茄根际土壤细菌真菌群落                            质，过孔径 0.25 mm 筛；并将样品分为 2 份，一份用于
               结构组成，解析番茄在不同生育期根际土壤微生物                           测定根际土壤生物学性状，4 ℃冰箱保存；另一份用
               群落变化特征，旨在为筛选具有延缓番茄植株衰                            于根际土壤微生物多样性分析，-80 ℃冰箱保存
               老、提高番茄产量和品质的有益功能微生物，构建
                                                                备用。
               番茄生态优质高产栽培技术体系提供理论依据和
                                                                1.3 微生物测序
               技术支撑。
                                                                    根际土壤样品总 DNA 提取、PCR 扩增和序列测
               1 材料与方法                                          定均由上海美吉生物医药科技有限公司完成。使用
                                                                Miseq平台进行高通量测序。
               1.1 试验概况
                                                                                 ®
                                                                    根 据 FastDNA   Spin  Kit  for  Soil 试 剂 盒（MP
                   试验番茄品种为中研 868（购自南宁市蔬菜种子
                                                                Biomedicals，美国）说明书进行总 DNA抽提，DNA浓
               市场），在广西大学农学院蔬菜基地（108°17′25″E，
                                                                度和纯度使用 NanoDrop2000 分光光度计（Thermo
               22°51′02″N）进行试验。采用盆栽（盆高 35 cm、直径
                                                                Fisher  Scientific，美 国 ）检 测 。 在 ABI  Gene⁃
               50 cm）方式进行种植。盆中装入土壤约 20 kg，土壤
                                                                    ®
                                                                Amp 9700 上进行 PCR 扩增，具体引物和测序类型
               类型为赤红壤；各处理田间管理措施（如施肥和灌溉
                                                                见表1。
               等）均相同。
                                                                    Illumina  Miseq 测 序 ：利 用 AxyPrep  DNA  Gel
                   土壤理化性状如下：pH 5.71，有机质含量 8.42
               g/kg，全氮含量 0.51 g/kg，全磷含量 0.67 g/kg，全钾            Extraction  Kit （Axygen  Biosciences，  Union  City，
               含量 7.21 g/kg；速效磷含量 0.59 mg/kg，速效钾含量              CA， USA）将同一样本的 PCR 产物进行回收产物纯
               51.01 mg/kg，碱解氮含量13.17 mg/kg。                    化，混合后使用 2% 琼脂糖凝胶进行回收检测，并用
               1.2 样品采集                                         Quantus™ Fluorometer （Promega，美国） 对回收产物
                                                                                                ®
                   分别于 2021 年 9 月 10 日、10 月 10 日、11 月 10 播      进 行 检 测 定 量 。 使 用 NEXTFLEX  Rapid DNA-
               种、育苗，每盆种植 1 株番茄，每个生育期 15 盆。于                     Seq Kit进行建库。
               2021 年 12 月 20 日同时采集番茄幼苗期（播种后 30                     利用 Illumina 公司的 MiseqPE250 平台进行测序
               d）、花芽分化期（播种后 60 d）、结果期（播种后 91 d） （上海美吉生物医药科技有限公司）。原始数据上传
               根际土壤样品。每个处理随机选取 5 株长势一致的                         至NCBI数据库中进行比对。
                                                  表1 测序类型与引物序列名称
                                           Table 1 Sequencing types and primer sequences

                   引物名称             引物类型                   引物序列                    测序平台           序列长度/bp
                   Primer name     Primer type        Primer sequence （5′→3′）  Sequencing platform  Sequencing length
                     338F       土壤细菌16S rRNA     ACTCCTACGGGAGGCAGCAG
                                                                                 MiSeqPE250          416
                     806R       Soil bacteria    GGACTACHVGGGTWTCTAAT
                    ITS1F       土壤真菌ITS          CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA
                                                                                 MiSeqPE300          242
                    ITS2R       Soil fungi       GCTGCGTTCTTCATCGATGC
               1.4 土壤生物学性状分析                                    物量碳测定采用容量分析法、微生物生物量氮测定
                   土壤 β-葡糖苷酶活性测定参照文献［11］、土壤                     采用茚三酮比色法、微生物生物量磷采用磷钼蓝比
               氨肽酶活性测定参照文献［12］、土壤磷酸酶活性测                         色法 ［14］ 。
               定参照文献［13］的方法进行。土壤微生物生物量                          1.5 统计分析
               碳、氮、磷采用氯仿熏蒸浸提法进行处理，微生物生                              试验数据采用 Excel 2019 和 IBM SPSS Statis⁃
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